José Luis Maravillas
Montero
Químico Bacteriólogo Parasitólogo
(2001-2006); Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, IPN (México).
Correo: jmaravillas@cinvestav.mx
Tema de
investigación:
Miosinas no convencionales de clase 1 en linfocitos B y su participación en las
modificaciones del citoesqueleto.
En años recientes se ha prestado mayor
atención a los procesos que regulan el citoesqueleto
de las células del sistema inmune, debido principalmente a la asociación que se
ha encontrado entre diversos defectos moleculares y fallas en funciones
celulares de vital importancia.
Las miosinas son proteínas motoras asociadas
a filamentos de actina que se han asociado
inevitablemente a células musculares, sin embargo, se ha caracterizado un gran
número de miosinas no convencionales en
células no musculares que parecen mediar funciones diferentes a la de
contracción. Se han reportado casos de inmunodeficiencias en donde alteraciones
en miosinas generan defectos en las
células tales como linfocitos T, leucocitos polimorfonucleares
y células dendríticas.
De especial interés en nuestro laboratorio es
el estudio de ciertas miosinas no convencionales de clase 1 que presentan una
alta expresión en linfocitos B. Al parecer, estas proteínas motoras median un
fenómeno conocido como “spreading” durante el cual,
las células B emiten proyecciones de su membrana con forma similar a dendritas
de células nerviosas. Este fenómeno se ha relacionado directamente con la
activación de los linfocitos, la discriminación de afinidades entre el BCR y
los antígenos, migración y adhesión e incluso en la sinapsis inmunológica.
Experiencia
de laboratorio y objetivos de trabajo: Caracterización de miosinas no
convencionales de clase 1 en linfocitos B murinos:
análisis de su expresión mediante RT-PCR y Western-Blot,
análisis de su patrón de distribución de durante el “spreading”
mediante microscopía confocal, ensayos de supresión
de su expresión mediante uso de inhibidores y RNA de interferencia; clonación y
expresión de fusiones con proteínas fluorescentes para análisis tipo “live-cell videomicroscopy”.
Figura
1. Inducción de “spreading” en linfocitos B murinos con el anticuerpo NIM-R8 (anti-CD44). Las células
previamente activadas con LPS e IL-4 fueron estimuladas a diferentes tiempos
para inducir la formación de dendritas; posteriormente fueron fijadas y teñidas
con faloidina-TRITC para ser observadas al
microscopio confocal. Células en reposo (A), 10
minutos (B), 30 minutos (C) y 60 minutos (D).
Figura
2. Miosina 1g se localiza en las proyecciones de membrana en los linfocitos B
durante el spreading. Linfocitos B de bazo
de ratón fueron pre-activados y estimulados mediante el anticuerpo anti-CD44.
Posteriormente las células se fijaron y permeabilizaron para teñir con
anti-Myo1g. Las imágenes muestran una célula con un enriquecimiento de esta
proteína en las proyecciones tipo dendritas.
Figura
3. Miosina 1c se localiza en la membrana de los linfocitos B. La imagen muestra un
linfocito B murino transducido
mediante un sistema retroviral con la fusión
GFP-Myo1c