QFB. Alexander Vargas
Hernández
Universidad Autónoma de
Puebla
avher78@hotmail.com
Análisis funcional de la
tirosina cinasa de Bruton de pacientes con agammaglobulinemia ligada al
cromosoma X.
La agammaglobulinemia ligada al
cromosoma X, es una inmunodeficiencia primaria, descrita por vez primera por el
Dr. Ogden C. Bruton en 1952. La XLA es el prototipo de una enfermedad con
deficiencia en anticuerpos, la cual se presenta en la infancia o edades muy
tempranas, por su patrón ligado al cromosoma X afecta únicamente a niños, los
cuales presentan frecuentes infecciones bacterianas. Los criterios de
diagnostico de esta inmunodeficiencia incluyen una profunda incapacidad en la
producción de anticuerpos, la cual resulta en una ausencia de sérica de todos
los isotipos de inmunoglobulinas. Una disminución de linfocitos B circulantes,
usualmente menos del 1%, así como una ausencia de células plasmáticas y centros germinales. El número y
funcionalidad de células T no están alteradas incluyendo la inmunidad mediada
por estas células (Report of an IUIS Scientific Committe. Clin. Exp. Immunol.
1999). La XLA se origina por mutaciones presentes en el gen que codifica para
la tirosina cinasa de Bruton, dando como resultado la falta de expresión de la
proteína y el bloqueo del desarrollo de
la célula B entre los estadios de pro-B y pre-B (Bolen JB. 1995).
La
tirosina cinasa de Bruton (Btk), es una tirosina cinasa que bajo condiciones
basales se encuentra predominantemente en citoplasma. Posterior a un
entrecruzamiento del BCR, Btk sufre fosforilaciones en residuos de tirosinas
presentes en algunos de sus dominios, estas fosforilaciones promueven un cambio
conformacional, activación y su reclutamiento
hacia la membrana citoplásmica (Mohamed A.J. et al 2000). La tirosina cinasa de
Bruton se caracteriza por un dominio amino terminal de homología a Pleckstrina
(PH) seguido por un dominio de homología Tec, el cual se encuentra dividido en
dos regiones una región conocida como de Btk y una región rica en Prolinas, un
dominio de homología a Src 3 (SH3), un
dominio SH2 y un dominio de cinasa en el carboxilo terminal (Tomlinson M.G. et
al 1999).
OBJETIVO GENERAL: Evaluar las posibles
modificaciones a nivel de estructura, así como
la funcionalidad de la tirosina cinasa de Bruton (Btk) de pacientes con
agammaglobulinemia ligada al cromosoma X (XLA).
Mutaciones puntuales a evaluar,
presentes en diferentes pacientes con XLA.
Clonación
del gen de Btk en el sistema pMSCV-IRES-GFP (A), producción de virus
recombinantes en las células empacadoras 293T (B) y células DT40 deficientes en
Btk transducidas con dichos virus (C).
A 
B
C
Análisis
in silico de las mutaciones aun no reportadas:
Mutación: L111P Mutación:
E605G
Dominio afectado: PH Dominio afectado: SH1
Localización: Inicio de la lamina
β-Plegada 7 Localización: Inicio de una Hélice
α